液相色谱法方法验证-凯发app

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液相色谱法在实验室是有着明星般的地位,经常会有一些分析人员犯一些低级的错误,出现问题便不知所措,而这些操作错误却常常在药典标准操作规范中均有描述,因此如果想成为分析方面的高手,更应该把药典及其标准操作规范两本工具书,反复的研读,不同的工作阶段都需要研读,熟能生巧。

方法摸索优化

1 一般在无参考标准或标准的方法无法直接套用时,需进行此项研究内容,如3类药。

2、样品溶剂:对样品有很好的溶解能力,实验室自然放置稳定存放12小时以上,与流动相有良好的互溶效果。

3、续滤液峰面积达稳定最大值,续滤液体积在5ml以下时较为适宜,否则需要重新筛选溶剂。

4、破坏程度10%左右(5%—15%)为宜,2mol/l酸或碱90水浴12小时无破坏即视为样品稳定,不必再追求降解度。4500lx光照48小时,样品粉末及溶液需要同时做。破坏后的样品溶液及空白溶剂均需调整至流动相ph方可进样,可避免对色谱柱产生不良影响。如果破坏超过20%,需要降低破坏条件。

5、分离度良好,测定无干扰,各峰峰纯度符合单峰要求。

6、梯度变化要有最高洗脱能力过程,目的证明所有的杂质成分均能够被洗脱检测。

7、方法摸索优化实验一般是不上资料的,只是体现在实验记录本中,除非是没有方法依据时,如3类药申报时,梯度选择及波长选择等均需要在资料中体现。

8、方法优化完成后,最后在同一天同一人,用同一台机器,对所有样品进行分析测定,具有可比性。

9、方法摸索优化实验采用工艺已经确定的实验室小试、实验室放大样品进行,前期用于原料合成样品配合检测时,可以采用大范围的梯度洗脱进行模糊检测分析。

检测限

先进空白,再进对照品浓溶液(1mg/ml),在主峰相同位置处选择空白溶剂1—2min范围的基线积分得出峰高,按照峰高的3倍计算样品浓度,直接用浓溶液稀释至目标浓度附近即可,资料中体现至少3张图(空白溶剂、浓溶液、及稀释液)。

溶液稳定性

实验过程中可取精密度中的图作为2h4h,甚至6h。做78个时间点,在撰写申报资料时最后以6个数据填报。

溶液稳定性数据至少做到16h稳定(尽量做得更长时间,都是自动进样,一个过夜就至少在12小时以上,时间太短无法证明溶液稳定性),极特殊情况下可以采用低温进样器或特殊的保存方法或现配现分析等操作,但要求有数据作为支持依据,方可将特殊处理方法定入标准。6个数据计算峰面积rsd<2%

流动相比例

最好在同一天对俩份样品溶液和俩份对照溶液进行。3个不同比例的流动相15张图(每个比例1张空白,2张对照,2个样品各1张),各条件下的含量数据(n=6)的rsd<2%。进资料的图谱必须采用生产线验证的第1批样品进行。最优标准条件的图谱每天都要重做,为了避免色谱柱效能下降或引起其他问题无法确认。

2020年5月31日 19:15
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